Během let 2006 – 2009 bylo na území České Republiky monitorováno celkem 6 nejobvyklejších včelích virů, které se objevují u včely medonosné Apis mellifera. Pomocí PCR testů byly potvrzeny souběžné infekce virů (DWV, ABPV a BQCV) v dospělcích včel a souběžně i ko-infekce virů s houbovým onemocněním vyvolaným Nosema apis a Nosema ceranae. Pro praktickou možnost detekce moru včelího plodu v populaci včelstev byla vyvinuta nová citlivá metoda detekce původce moru včelího plodu Paenibacillus larvae ze včelí měli. Byly porovnány různé přístupy extrakce spor z včelí měli a lyzování spor. Citlivost PCR testu na přítomnost Paenibacillus larvae v měli byla porovnána s klasickou kultivační metodou. Metoda PCR detekce moru včelího plodu byla dále studována a zefektivňována. Pomocí přeuspořádání vzorků do vytvořených matic a vytvoření směsných vzorků, byla vyvinuta metoda, u které bylo možné analyzovat 1000 vzorků pomocí 35 PCR reakcí. Dalším přístupem k vytvoření robustní a jednoduché metody pro screening moru včelího plodu bylo vytvoření, laboratorní ověření a srovnání citlivé detekční metody, založené na kultivačním testu na papírových kartách RIDA®COUNT se specifickým kultivačním médiem, specifickými selekčními podmínkami pro Paenibacillus larvae a chromogenem zvýrazňující narostlé kolonie bakterií. Konečně v oblasti detekce včelích houbových onemocnění byla zavedena diferenciální diagnostika obou mikrosporidií na molekulární úrovni a dále potvrzena možnost mikroskopické diferenciální diagnostiky Nosema apis a Nosema ceranae. Tato mikroskopická metoda je použitelná v polních podmínkách. Výsledky mikroskopického vyšetření byly validovány paralelně s PCR testem.
Předběžná náplň práce v anglickém jazyce
Altogether, the six most common bee viruses which infect the honey bee (Apis mellifera) were monitored in the territory of the Czech Republic between 2006 and 2009. Parallel infections of viruses (DWV, ABPV and BQCV) in bee adults and parallel co-infection of viruses with fungal diseases caused by Nosema apis and Nosema ceranae were confirmed by PCR tests. A new sensitive method of detection of the originator of the American foulbrood (Paenibacillus larvae) from bee debris was developed for the practical use of detection of AFB disease in bee populations. Various approaches for the extraction of spores from bee debris and lyses of spores were compared. The sensitivity of PCR tests for the presence of Paenibacillus larvae in debris was compared with the classic cultivation method. The PCR method for the detection American foulbrood was further studied and developed to be more efficient. A new method, based on a matrix-like sample re-arrangement and a use of pooled samples, has been developed for testing 1000 samples in 35 PCR reactions. Another goal was to develop a robust and fast screening method for American foulbrood based on the cultivation test using paper sheets RIDA®COUNT with a specific cultivation medium, specific selection conditions for Paenibacillus larvae and chromogen visualization of the grown bacterial colonies. This method has been evaluated in the laboratory conditions and its sensitivity has been verified. Finally, the differential diagnostics of both microsporidia on a molecular level was implemented in the area of detection of bee fungal diseases and a possibility of microscopic differential diagnostics of Nosema apis and Nosema ceranae was confirmed. This microscopic method can be used in field conditions. The results of a microscopic examination were validated parallel with the PCR test.
- zadáno vedoucím/školitelem