Stanovení lipidového profilu v biologickém materiálu metodou HPLC-ELSD

• Název práce v češtině: Stanovení lipidového profilu v biologickém materiálu metodou HPLC-ELSD
• Název v anglickém jazyce: Determination of the lipid profile in biological material by the method HPLC-ELSD
• Klíčová slova: HPLC-ELSD, fosfolipidy
• Klíčová slova anglicky: HPLC-ELSD, phospholipids
• Akademický rok vypsání: 2008/2009
• Typ práce: diplomová práce
• Jazyk práce: čeština
• Ústav: Katedra analytické chemie (31-230)
• Vedoucí / školitel: prof. RNDr. Věra Pacáková, CSc.
• Řešitel: skrytý - zadáno vedoucím/školitelem
• Datum přihlášení: 10.12.2008
• Datum zadání: 29.04.2010
• Datum odevzdání elektronické podoby: 30.05.2010
• Datum proběhlé obhajoby: 24.05.2010
• Oponenti: prof. RNDr. Ladislav Feltl, CSc.
• Konzultanti: RNDr. Eva Tvrzická, CSc.

Zásady pro vypracování

Zpracování literární rešerše.
Naplánování experimentů
Předběžné experimenty
Vypracování analytické metody
Aplikace vyvinuté metody na biologické materiály

Seznam odborné literatury

W. W. Christie: Rapid separation and quantification of lipid classes by HPLC and mass (light-scattering) detection. J. Lipid Res. 26, 1985, 507-12.
R. A. Moreau: The evaporative light-scattering detector as a tool for the analysis of lipids by HPLC, in HPLC of Acyl Lipids, pp. 93-115, HNB Publishing, New York 2005.

Předběžná náplň práce

Lipidový profil zahrnuje tzv. neutrální lipidy (estery cholesterolu, triglyceridy, volný cholesterol ...), které lze metodou TLC separovat pomocí neutrální mobilní fáze (uhlovodík-ether-org. kyselina), a polární lipidy (fosfolipidy ? fosfatidylethanolamin, fosfatidylserin, fosfatidylinositol, fosfatidylcholin ...), které se metodou TLC separují pomocí polární mobilní fáze (chloroform-methanol-voda). Standardní biochemické metody umožňují pouze stanovení celkového a volného cholesterolu a triglyceridů, stanovení celkových fosfolipidů bylo již před několika lety zrušeno. Nicméně znalost složení jednotlivých složek je potřebná pro základní biomedicinský výzkum. Metoda HPLC-ELSD (evaporative light-scattering detector) je pro tento účel optimální. Využívá tzv. hmotový detektor, který je založen na principu měření rozptylu světla na pevných částicích separovaného analytu po odpaření mobilní fáze a je jistou obdobou FID v plynové chromatografii. Použití UV detektoru není pro daný problém vhodné, vzhledem k nutnosti používat vlnové délky pod 200 nm. Úkolem diplomové práce bude v první fázi uvedení metody do provozu, optimalisace podmínek, posouzení vhodnosti vnitřního standardu. Ve druhé fázi bude metoda aplikována na stanovení lipidového profilu v krevní plasmě, buněčných membránách a tkáních (sval, játra, mozek). Biologický materiál bude poskytnut z výzkumných projektů 4. interní kliniky 1. LF UK, pro které bude stanovení využito.

Předběžná náplň práce v anglickém jazyce

Lipid profile includes so called neutral lipids (cholesterol esters, triglycerides, free cholesterol ...) that can be separated by TLC using neutral mobile phase (hydrocarbon-ether-organic acid), and polar lipids (phospholipids - phosphatidylethanolamine, phosphatidyl-serine, phosphatidylinositol, phosphatidylcholine), that are separated by TLC with polar mobile phase (chloroform-methanol-water). Only determination of total and free cholesterol and triglycerides is possible by standard biochemical methods, determination of total phospholipids being cancelled several years ago. Nevertheless, the knowledge of lipid pattern is necessary for basic biomedical research. The method HPLC-ELSD (evaporative light-scattering detector) is optimal for the purpose. So-called mass detector measures light scattering on solid particles of separated analyte after evaporation of mobile phase; it is a parallel to the FID in gas chromatography. The use of UV detector is not applicable for the purpose, because wavelengths below 200 nm should be used. The aim of the presented diploma work will be at first introduction of the method and examination of appropriate internal standard. At second, the method will be applied to the determination of lipid profile in blood plasma, cell membranes, as well as tissues (muscle, liver brain). Biological material will be obtained from the research projects of the 4th Department of Medicine, 1st Faculty of Medicine, Charles University in Prague, where this method will be used.