Optimalizace nastavení vnitrobuněčného pH kvasinek elektroporační metodou
Název práce v češtině: | Optimalizace nastavení vnitrobuněčného pH kvasinek elektroporační metodou |
---|---|
Název v anglickém jazyce: | Optimization of the yeast intracellular pH setting by electroporation |
Akademický rok vypsání: | 2005/2006 |
Typ práce: | bakalářská práce |
Jazyk práce: | čeština |
Ústav: | Fyzikální ústav UK (32-FUUK) |
Vedoucí / školitel: | doc. RNDr. Jaroslav Večeř, CSc. |
Řešitel: | skrytý![]() |
Datum přihlášení: | 11.11.2005 |
Datum zadání: | 11.11.2005 |
Datum a čas obhajoby: | 13.09.2006 00:00 |
Datum odevzdání elektronické podoby: | 13.09.2006 |
Datum proběhlé obhajoby: | 13.09.2006 |
Oponenti: | RNDr. Roman Chaloupka, Ph.D. |
Zásady pro vypracování |
1) Zvládnout základní poznatky o fluorescenci molekul
2) Naučit se pracovat s fluorescenčním spektrometrem 3) Naučit se pěstovat kvasinkové kultury a barvit je fluorescenčními sondami 4) Testovat nastavování vnitrobuněčného pH pomocí elektroporace při různých experimentálních podmínkách a získané výsledky vyhodnotit. |
Seznam odborné literatury |
1) Prosser V. a kol., Experimentální metody biofyziky, Academia, Praha 1989
2) Drápalová H., Studium vlivu stresových faktorů na intracelulární pH kvasinek pomocí fluorescenčních sond, diplomová práce, FÚ MFF UK, Praha 2005 3) časopisecká literatura dle pokynů vedoucího práce |
Předběžná náplň práce |
Při měření vnitrobuněčného pH pomocí fluorescenčních sond je nezbytné provést tzv. kalibraci sondy - tj. změřit fluorescenční odezvu barviva lokalizovaného v cytoplazmě buněk pro několik vhodně zvolených známých hodnot vnitrobuněčného pH. Pomocí těchto bodů potom zkonstruujeme kalibrační funkci sondy v intervalu pH, který nás zajímá.
V případě kvasinek vybavených buněčnou stěnou je možno nastavit vnitrobuněčné pH metodou elektroporace. Na suspenzi kvasinek jsou aplikovány vysokonapěťové impulzy, které krátkodobě vytvářejí v cytoplazmatické membráně buněk póry, jimiž dochází k vyrovnání pH mezi vnějším prostředím a cytoplazmou. Tento proces závisí jak na parametrech aplikovaných VN impulzů (amplituda, šířka, počet, ..), tak i dalších experimentálních podmínkách (koncentrace suspenze, vzdálenost elektrod v kyvetě, složení pufru a jeho koncentrace, atd.). Cílem této práce bude optimalizovat popsanou kalibrační proceduru u kvasinek při použití fluorescenční sondy pyranin. |