In vitro saturační studie radioaktivně značené monoklonální protilátky carotuximab

• Název práce v češtině: In vitro saturační studie radioaktivně značené monoklonální protilátky carotuximab
• Název v anglickém jazyce: In vitro saturation study of radiolabelled monoclonal antibody carotuximab
• Klíčová slova: carotuximab, endoglin (CD105), in vitro saturační studie, radioaktivní značení, TRC105
• Klíčová slova anglicky: carotuximab, endoglin (CD105), in vitro saturation study, radiolabelling, TRC105
• Akademický rok vypsání: 2021/2022
• Typ práce: diplomová práce
• Jazyk práce: čeština
• Ústav: Katedra biofyziky a fyzikální chemie (16-16110)
• Vedoucí / školitel: Mgr. Pavel Bárta, Ph.D.
• Řešitel: skrytý - zadáno vedoucím/školitelem
• Datum přihlášení: 01.10.2021
• Datum zadání: 07.12.2021
• Datum a čas obhajoby: 14.09.2023 09:00
• Datum odevzdání elektronické podoby: 29.07.2023
• Datum proběhlé obhajoby: 14.09.2023
• Oponenti: PharmDr. Zbyněk Nový, Ph.D.

Zásady pro vypracování

1. Vyhledání dostupných informací k zadané tématice v odborné literatuře a informačních databázích.
2. Osvojení si techniky práce s buněčnými kulturami, radionuklidy, radioaktivně značenými ligandy a přístroji pro měření radioaktivního záření na oddělení radionuklidové laboratoře.
3. Vyhodnocení získaných výsledků a jejich konfrontace s teoretickými poznatky.
4. Shrnutí získaných teoretických poznatků, vlastní experimentální práce, experimentálních výsledků a jejich následné diskuse v diplomové práci v českém jazyce.

Seznam odborné literatury

1. Björke H, Andersson K. Measuring the affinity of a radioligand with its receptor using a rotating cell dish with in situ reference area. Appl Radiat Isot. 2006 Jan;64(1):32-7.
2. Bigott-Hennkens HM, Dannoon S, Lewis MR, Jurisson SS. In vitro receptor binding assays: general methods and considerations. Q J Nucl Med Mol Imaging. 2008 Sep;52(3):245-53.
3. Price EW, Orvig C. Matching chelators to radiometals for radiopharmaceuticals. Chem Soc Rev. 2014 Jan 7;43(1):260-90.
4. Vincent Q. Sier et al., Endoglin/CD105-Based Imaging of Cancer and Cardiovascular Diseases: A Systematic Review. Int J Mol Sci. 2021, 22: 4804.
5. Lee S. Rosen et al., A Phase 1 First-in-Human Study of TRC105 (Anti-Endoglin Antibody) in Patients with Advanced Cancer. Clin Cancer Res. 2012 Sep 1; 18(17): 4820–4829.

Předběžná náplň práce

Student(ka) se seznámí se současnými poznatky v oblasti problematiky nádorových onemocnění se zaměřením na angiogenezi a v oblasti kinetiky receptorových interakcí v in vitro prostředí prostřednictvím odborné literatury a informačních databází. Dále si osvojí práci s buněčnými kulturami s následným využitím pro buněčné experimenty. V oblasti in vitro experimentů se zaměří na interakci receptor-radiofarmakum a s tím spojené stanovení kinetického parametru jako je disociační konstanta. Cílovým receptorem na primární buněčné kultuře bude receptor CD105 (endoglin). Student(ka) bude pracovat v prostředí radionuklidové laboratoře, proto si osvojí bezpečnost práce s radioaktivními zářiči. V rámci experimentů se bude provádět nepřímé radioaktivní značení monoklonální protilátky vybraným radionuklidem. Připravené radiofarmakum bude testováno na čistotu a stabilitu pomocí ITLC a HPLC metod. Experimenty s radioaktivně značenou protilátkou na buněčné kultuře budou provedeny pomocí klasické manuální techniky a současně pomocí přístroje LigandTracer Yellow, umožňující automatickou radioimunoanalýzu v reálném čase. Naměřené hodnoty prostřednictvím manuální techniky se budou vyhodnocovat pomocí programů jako MS Excel a GraphPad Prism a pro automatickou radioimunoanalýzu prostřednictvím programu TraceDrawer. Veškeré teoretické a praktické poznatky stejně tak jako výsledky a jejich diskuse budou shrnuty v diplomové práci.

Předběžná náplň práce v anglickém jazyce

The master student will search for the current knowledge in the area of cancer diseases particularly aimed at the angiogenenic process and also in the field of receptor interaction kinetics in in vitro environments with the help of scientific literature. The master students´s experimental work will be focused on the cell culturing with the subsequent use in cell experiments. The main target of in vitro experiments will be radiopharmaceutical – receptor interaction followed with dissociation constant assessment. CD105 (endoglin) receptor will be used as the targeted receptor for radiolabelled monoclonal antibody in experiments. The master student will work at radionuclide laboratory with the appropriate safety rules. The master student will perform the radiolabelling of monoclonal antibody with a chosen radionuclide. The prepared radiolabelled antibody will be tested on its purity and stability with the employment of ITLC and HPLC techniques. The experiments with a cell line will be performed by either the manual technique or automated radioimmunoassay represented by LigandTracer technology. The obtained results from the manual technique or radioimmunoassay will be analysed by MS Office Excel and GraphPad Prism or by TraceDrawer, respectively. The final task for the master student is to summarize the theoretical, practical and measured data in a thesis.