Exprese a vazebné vlastnosti lidského galektinu-4
Název práce v češtině: | Exprese a vazebné vlastnosti lidského galektinu-4 |
---|---|
Název v anglickém jazyce: | Expression and binding properties of human galectin-4 |
Klíčová slova: | galektin-4, sacharid, inhibice, ELISA |
Klíčová slova anglicky: | galectin-4, carbohydrate, inhibition, ELISA |
Akademický rok vypsání: | 2020/2021 |
Typ práce: | bakalářská práce |
Jazyk práce: | čeština |
Ústav: | Katedra biochemie (31-250) |
Vedoucí / školitel: | doc. RNDr. Pavla Bojarová, Ph.D. |
Řešitel: | skrytý![]() |
Datum přihlášení: | 11.11.2020 |
Datum zadání: | 18.11.2020 |
Datum potvrzení stud. oddělením: | 18.11.2020 |
Datum odevzdání elektronické podoby: | 12.12.2023 |
Datum proběhlé obhajoby: | 30.01.2024 |
Oponenti: | RNDr. Daniel Kavan, Ph.D. |
Konzultanti: | Ing. Kristýna Slámová, Ph.D. |
Seznam odborné literatury |
M. T. Elola, A. G. Blidner, F. Ferragut, C. Bracalente, G. A. Rabinovich, Biochem. J. 2015,469, 1-16. A. Satelli, P. S. Rao, S. Thirumala, U. S. Rao, Int. J. Cancer 2011,129, 799-809. H. Barrow, X. Guo, H. H. Wandall, J. W. Pedersen, B. Fu, Q. Zhao, C. Chen, J. M. Rhodes, L.-G. Yu, Clin. Cancer Res. 2011,17, 7035-7046. |
Předběžná náplň práce |
Galektiny jsou skupina živočišných proteinů specificky vázajících oligosacharidy obsahující galaktosu na neredukujícím konci. Mají zásadní roli v obranných mechanismech, buněčné proliferaci, apoptóze, adhezi a migraci. Dosud je známo jen málo informací o patofyziologii galektinu-4 (Gal-4). Jeho výrazně snížená exprese v tkáni pevného kolorektálním tumoru stimuluje progresi tumoru a tvorbu metastáz, zatímco v krevním séru pacientů s kolorektálním karcinomem byla pozorována významně zvýšená hladina galektinu-4 ve srovnání se zdravou populací. Galektin-4 patří mezi galektiny tzv. tandemového typu, jedná se o kovalentní heterodimer s různými vazebnými doménami na každé podjednotce. Cílem této práce je rekombinantně exprimovat lidský galektin-4 a stanovit jeho vazebnou afinitu k vybraným sacharidovým ligandům metodou ELISA. Získané výsledky přispějí k porozumění významu galektinu-4 jako nového biomarkeru kolorektální rakoviny. Cíle práce: · exprese lidského galektinu-4 z plasmidu připraveného v laboratoři v Escherichia coli a jeho purifikace afinitní chromatografií · optimalizace imunochemického stanovení ELISA pro měření vazebné afinity galektinu-4 k sacharidovým ligandům · stanovení afinity galektinu-4 k vybraným sacharidovým ligandům a diskuze získaných výsledků Metody: práce s DNA, transformace a kultivace E. coli, chromatografická purifikace lektinů, imunochemické stanovení. |
Předběžná náplň práce v anglickém jazyce |
Galectins are a family of animal proteins that specifically bind oligosaccharides containing galactose at the non-reducing end. They play a crucial role in defense mechanisms, cell proliferation, apoptosis, adhesion, and migration. To date, little information is known on the pathophysiology of galectin-4 (Gal-4). Its strongly decreased expression in the tissue of solid colorectal carcinoma stimulates its progression and metastasis whereas significantly increased levels of galectin-4 have been observed in the blood serum of colorectal cancer patients compared to the healthy population. Galectin-4 belongs to the galectins of the so-called tandem repeat type, it is a covalent heterodimer with different binding domains on each subunit. The aim of this work is to recombinantlyo express human galectin-4 and to determine its binding affinity to selected carbohydrate ligands by ELISA. The obtained results will contribute to understanding of the importance of galectin-4 as a new biomarker of colorectal cancer. Goals of the thesis: · Expression of human galectin-4 from a plasmid prepared in the laboratory in Escherichia coli and its purification by affinity chromatography · Optimization of immunochemical ELISA assy for measuring the binding affinity of galectin-4 to carbohydrate ligands · Determination of the affinity of galectin-4 to selected carbohydrate ligands and discussion of the results obtained Methods: work with DNA, transformation and cultutivation of E. coli, chromatographic purification of lectins, immunochemical assay. |