Využití průtokové cytometrie pro diagnostiku a charakterizaci dědičných poruch glykosylace

• Název práce v češtině: Využití průtokové cytometrie pro diagnostiku a charakterizaci dědičných poruch glykosylace
• Název v anglickém jazyce: Flow cytometry in the diagnostics and characterization of congenital disorders of glycosylation
• Klíčová slova: Dědičné poruchy glykosylace, glykany na povrchu buňky, fibroblasty, lektiny, průtoková cytometrie, fluorescenční mikroskopie.
• Klíčová slova anglicky: Congenital disorders of glycosylation, cell surface glycans, fibroblasts, lectins, flow cytometry, fluorescent microscopy.
• Akademický rok vypsání: 2019/2020
• Typ práce: diplomová práce
• Jazyk práce: čeština
• Ústav: Katedra biochemie (31-250)
• Vedoucí / školitel: RNDr. Hana Hansíková, CSc.
• Řešitel: skrytý - zadáno vedoucím/školitelem, čeká na schválení garantem
• Datum přihlášení: 07.11.2019
• Datum zadání: 08.11.2019
• Datum odevzdání elektronické podoby: 17.06.2021
• Datum proběhlé obhajoby: 12.07.2021
• Oponenti: prof. RNDr. Petr Hodek, CSc.
• Konzultanti: RNDr. Nina Ondrušková, Ph.D.

Předběžná náplň práce

Dědičné poruchy glykosylace (CDG, z angl. Congenital Disorders of Glycosylation) tvoří širokou skupinu (> 130 subtypů) vrozených metabolických onemocnění, které jsou zapříčiněné mutacemi v genech pro enzymy a proteiny glykosylační dráhy. Pro „screening“ CDG se standardně používá analýza sérových glykoproteinů transferinu a apolipoproteinu C-III, avšak tato metoda neumožňuje zachycení všech subtypů CDG, které v důsledku toho mohou být poddiagnostikované. Poslední výzkumy naznačují, že sem patří především 1.) defekty v biosyntéze glykosylfosfatidylinositolové (GPI) kotvy a jejího připojení na proteiny, a 2.) skupina poruch několika glykosylačních drah („defects in multiple glycosylation pathways“) způsobených narušenou homeostázou Golgiho aparátu. Pacienti s těmito poruchami jsou většinou identifikováni pomocí celoexomového sekvenování, pro potvrzení diagnózy a charakterizaci glykosylační poruchy na buněčné úrovni jsou ale potřebné další biochemické analýzy. Cílem předkládané diplomové práce je zavedení a aplikace těchto metod na pracovišti, které je hlavním centrem pro diagnostiku a výzkum CDG v České republice. Student bude provádět experimenty na buněčných liniích kultivovaných fibroblastů získaných z kožní biopsie zdravých kontrol a CDG suspektních pacientů. Fibroblasty bude značit pomocí vybraných markerů (protilátek, lektinů) s navázanou fluorescenční značkou a analyzovat za použití průtokové cytometrie (PC). Jako doplňková metoda, se kterou budou porovnány výsledky PC, poslouží imunofluorescenční značení buněk a snímání signálu pomocí fluorescenčního mikroskopu.