skrytý - zadáno vedoucím/školitelem, čeká na schválení garantem
Datum přihlášení:
16.11.2018
Datum zadání:
16.11.2018
Datum odevzdání elektronické podoby:
11.08.2021
Datum proběhlé obhajoby:
13.09.2021
Oponenti:
Mgr. Zdeněk Zadražil, Ph.D.
Předběžná náplň práce
Imunoterapie založená na T lymfocytech exprimujících chimerické antigenní receptory (CAR) se ukázala být velice úspěšnou v léčbě akutní lymfoblastické leukémie (ALL), což vedlo ke snaze vyvinout imunoterapeutické postupy založené na CAR T lymfocytech i pro další hematologické malignity. V současné době je snaha vylepšit modifikace T lymfocytů tak, aby léčba pacientů byla efektivnější. Pokaždé je pak třeba tuto modifikaci empiricky ověřit v pokusech in vitro. Rozhodli jsme se studovat efekt cytokinu IL-21 na protinádorovou funkci CD19 specifických CAR T lymfocytů pomocí in vitro testů. Do T buněk byl vnesen konstrukt, který koexprimoval IL-21 pod kontrolou inducibilního NFAT promotoru společně s CAR proti CD19. V sérii experimentů byly porovnávány vlastnosti těchto buněk po kokultivaci s nádorovými B buněčnými liniemi a buňkami CLL získané od pacientů. Z výsledků vyplývá, že CAR T buňky, které exprimují IL-21, lépe proliferují a lépe se aktivují, a to i po opakované stimulaci leukemickými buňkami. Kromě CARů specifických proti molekule CD19 jsme se zabývali i CARy specifickými proti molekule CLL1, která je v literatuře popisována jako jeden ze slibných targetů pro léčbu AML. Připravili jsme CAR T buňky proti CLL1 produkující IL-21. Pro tento účel bylo třeba připravit plazmid, který kromě sekvence pro CAR obsahuje i gen pro IL-21 pod kontrolou NFAT promotoru. Funkčnost plazmidu byla ověřena transfekcí buněk PBMC a kultivací CAR T buněk, které exprimovali daný CAR a zároveň IL-21. Koncentrace IL-21 byla změřena ELISA testem. Použití interleukinu 21 v CAR T terapii by mohlo přinést pozitivní účinky.
Předběžná náplň práce v anglickém jazyce
Immunotherapy based on chimeric antigen receptor (CAR)-expressing T lymphocytes has proven to be highly successful in the treatment of acute lymphoblastic leukemia (ALL), leading to development of CAR-based immunotherapies for other hematologic malignancies. Currently, efforts are underway to refine T cell modifications to make patient treatment more effective. Each time, this modification then needs to be empirically validated in in vitro experiments. We decided to study the effect of the cytokine IL-21 on the antitumor function of CD19-specific CAR T cells using in vitro assays. A construct that co-expressed IL-21 under the control of the inducible NFAT promoter together with CARs against CD19 was introduced into T cells. In a series of experiments, the properties of these cells were compared after coculture with tumor B cell lines and CLL cells obtained from patients. The results showed that CAR T cells that express IL-21 proliferate and activate better, even after repeated stimulation with leukemia cells. In addition to CARs specific against the CD19 molecule, we also investigated CARs specific against the CLL1 molecule, which has been described in the literature as one of the promising targets for the treatment of AML. We prepared CAR T cells against CLL1 producing IL-21. For this purpose, we had to prepare a plasmid that contains the IL-21 gene under the control of the NFAT promoter in addition to the sequence for CAR. The functionality of the plasmid was verified by transfecting PBMCs and culturing CAR T cells expressing the given CAR and IL-21. The concentration of IL-21 was measured by ELISA. The use of interleukin-21 in CAR T therapy could yield positive effects.