Disertační práce je zaměřena na detailní studium rozdílů v průběhu translace specifických proteinů mezi MII oocyty zrajícími in vitro a in vivo, stejně tak jako mezi časnými embryi (zygotami) získanými po in vivo fertilizaci a těmi, které byly získány po fertilizaci in vitro. Translace specifických mRNA je důležitá pro zdárný průběh meiotického zrání savčího oocytu a rané embryogeneze. Je známo, že aktivně translatované mRNA jsou vázány mnoha ribozomálními jednotkami. Pomocí izolace polyzomálních frakcí ze savčích oocytů a časných embryí budou identifikovány rozdílné specifické transkripty, které jsou různě aktivně translatovány vzhledem k tomu, zda jsou oocyty či embrya kultivovány in vitro nebo zda jsou získávány in vivo. Nalezené rozdílně exprimované proteiny pak budou dále validovány pro jejich schopnost aktivně se podílet na regulaci zásadních morfologických změn během meiózy savčího oocytu a během časného embryonálního vývoje. Kromě toho též hodláme určit úlohu regulačních faktorů působících na 3’- a 5’-konci mRNA na stabilizaci a aktivaci specifických transkriptů během vývoje oocytů a časných embryí, se zaměřením na rozdíly mezi in vitro a in vivo produkovanými oocyty a zygotami. Náplní práce bude především příprava a charakterizace polysomálních frakcí z extraktů oocytů a časných embryí za různých podmínek a následná bioinformatická analýza dat získaných z NGS polysomálních frakcí.
Předběžná náplň práce v anglickém jazyce
The dissertation is focused on the study of the differences in the temporal pattern of translation of specific transcripts between the MII oocytes matured in vitro and in vivo, as well as between the zygotes obtained after in vivo fertilization versus those obtained after in vitro fertilization. The translation of specific mRNAs is essential for the correct progression of the oocyte through meiotic maturation and for early embryogenesis. It is known that the actively translated mRNAs are bound by number of ribosomal subunits. Using the method of polysomal fractions isolation from mammalian oocytes and early embryos the particular specific transcripts, which are actively translated, will be identified in correlation with the different mode of obtaining the oocytes and early embryos (in vitro vs. in vivo). Subsequently, the role of these actively translated transcripts, as well as that of the associated proteins in the regulation of the major morphological changes during mammalian oocyte meiotic maturation and early embryonic development will be analyzed. Furthermore, translational regulation of the factors associated with the mRNA 3’- and 5’-end during oocyte and zygote development, will be also studied with the emphasis on finding differences between oocytes and zygotes produced in vitro and in vivo. The subject of the work will be mainly the preparation and characterization of the polysomal fractions from the extracts of oocytes and erly embryos obtained under different conditions, followed by bioinformatic analyses of the data obtained from NGS of polysomal fractions.
- zadáno vedoucím/školitelem