Umlčování exprese transgenů v rostlinách bramboru a v buněčné linii tabáku BY-2

• Název práce v češtině: Umlčování exprese transgenů v rostlinách bramboru a v buněčné linii tabáku BY-2
• Název v anglickém jazyce: Transgene silencing in potato plants and tobacco cell line BY-2
• Akademický rok vypsání: 2017/2018
• Typ práce: rigorózní práce
• Jazyk práce: čeština
• Ústav: Katedra experimentální biologie rostlin (31-130)
• Řešitel: skrytý - zadáno a potvrzeno stud. odd.
• Datum přihlášení: 17.05.2018
• Datum zadání: 17.05.2018
• Datum potvrzení stud. oddělením: 06.06.2018
• Datum odevzdání elektronické podoby: 17.05.2018
• Datum proběhlé obhajoby: 25.06.2018

Předběžná náplň práce

Vnesení transgenu do rostlinné buňky a ověření jeho integrace do genomu není zárukou jeho stabilní exprese. Na úrovni jednotlivých buněk totiž mnohdy dochází k rozpoznávání transkriptů vnesených genů (jejich degradačních produktů) a vyvolání obranné reakce - RNA interference (silencingu) - vedoucího k cílené degradaci mRNA daného genu (popř. až zastavení transkripce genu v důsledku metylace DNA a změny struktury chromatinu). Tento mechanismus umlčování genové exprese (tzv. silencing) je rostlinami využíván (a možná i původně vytvořen) na ochranu proti virové infekci. Proto se informace o nutnosti umlčet expresi příslušných genů ve formě siRNA šíří mezi sousedními buňkami i prostřednictvím floémového toku na úrovni celé rostliny.
Diplomová práce naváže na aktuální výsledky týmu v některé z těchto problematik - studium stability exprese transgenů, jejich samovolného či indukovaného umlčování, reaktivace jejich exprese a analýz methylačního stavu DNA. Modelové organismy: lilek brambor, tabáková buněčná linie BY-2. Metodiky: isolace a analýzy nukleových kyselin (PCR, hybridizace), hydrogensiřičitanové sekvenování, fluorescenční mikroskopie (detekce GFP), přípravy genových konstruktů a transformace rostlinných buněk (příprava a analýzy transgenních rostlin), ...