Srovnání vybraných karbocyaninových fluorescenčních sond z hlediska jejich použitelnosti při měření změn membránového potenciálu kvasinek.
| Název práce v češtině: | Srovnání vybraných karbocyaninových fluorescenčních sond z hlediska jejich použitelnosti při měření změn membránového potenciálu kvasinek. |
|---|---|
| Název v anglickém jazyce: | The comparison of the performace of selected carbocyanine dyes in fluorescent probing of yeast cell membrane potential. |
| Klíčová slova: | membránový potenciál, kvasinky, S. cerevisiae, fluorescenční sondy |
| Klíčová slova anglicky: | membrane potential, yeast, S. cerevisiae, fluorescent probes |
| Akademický rok vypsání: | 2011/2012 |
| Typ práce: | diplomová práce |
| Jazyk práce: | čeština |
| Ústav: | Fyzikální ústav UK (32-FUUK) |
| Vedoucí / školitel: | prof. RNDr. Jaromír Plášek, CSc. |
| Řešitel: | skrytý - zadáno a potvrzeno stud. odd. |
| Datum přihlášení: | 29.10.2011 |
| Datum zadání: | 03.11.2011 |
| Datum potvrzení stud. oddělením: | 13.12.2011 |
| Datum a čas obhajoby: | 27.05.2013 00:00 |
| Datum odevzdání elektronické podoby: | 11.04.2013 |
| Datum odevzdání tištěné podoby: | 12.04.2013 |
| Datum proběhlé obhajoby: | 27.05.2013 |
| Oponenti: | RNDr. Jan Krůšek, CSc. |
| Konzultanti: | doc. RNDr. Dana Gášková, CSc. |
| Zásady pro vypracování |
| 1. Seznámit se se základy fluorescenční spektroskopie a s metodou synchronně skenované fluorescence.
2. Seznámit se se způsoby použití redistribučních fluorescenčních sond v buněčných suspenzích se zvláštním zřetelem na možnosti převodu měřených spekter fluorescence na odpovídající změny membránového potenciálu sondovaných buněk. 3. Seznámit se se základy buněčné biologie kvasinek, ze zřetelem na jejich membránový potenciál a jeho souvislosti s iontovými kanály a transportéry. 4. Rozšířit metodu synchronně skenované fluorescence a rozkladu spekter vyvinutou pro barvivo diSC3(3) na další karbocyaninová barviva, konkrétně diSC3(5) a vybraná barviva typu diOCm(n) a diICm(n). 5. Ověřit použitelnost porovnávaných barviv při sledování změn mebránového poteciálu kvasinek S. cerevisiae (především kvasinek kmene AD1-3) vyvolaných změnami koncentrace K+ iontů v médiu. 6. Kriticky zhodnotit relativní přednosti i nedostatky různých karbocyaninových barviv při monitorování změn membránového potenciálu. 7. Aplikovat ověřenou metodiku v alespoň jedné studii zaměřené na změny membránového potenciálu kvasinek vyvolané látkami ovlivňujícíci K+ membránové kanály, resp. transportéry. |
| Seznam odborné literatury |
| 1. Alberts, B. et al., Ed. (2002) Molecular Biology of the Cell, Fourth Ed., Garland science, New York.
2. Feldmann, H. (2010) Yeast: Molecular and Cell Biology. J. Wiley & Sons, 2010. 3. Friedman, M.H., Principles and Models of Biological Transport. Second edition, Springer, New York. 4. Lakowicz, J. R. (1999) Principles of fluorescence spectroscopy, Second edition, Kluwer Academic/Plenum Publishers, New York 5. Plášek J., Sigler K.: Slow fluorescent indicators of membrane potential: a survey of different approaches to probe response analysis, J. Photochem. Photobiol. B: Biology, 33 (1996) 101-124 6. Další časopisecká literatura dle pokynů vedoucího |
| Předběžná náplň práce |
| Kationická redistribuční fluorescenční barviva se osvědčila jako sondy membránového potenciálu. V případě kvasinkových buněk byla v oddělení biofyziky FÚUK vyvinuta metoda kombinující techniku synchronně skenované fluorescence s lineárním rozkladem spekter, která na základě detailního teroretického modelu odezvy fluorescenčních sond na membránový potenciál umožňuje kvantifikovat změny membránového potenciálu kvasinek v jednotkách mV. Cílem této práce bude porovnat dosud používanou sondu diSC3(3) s dalšími barvivy karbocyaninové skupiny a provést pomocí barviv se zjištěnou optimální odezvou sérii experimentů s praktickým významem pro fyziologii kvasinek. |