Témata prací (Výběr práce)Témata prací (Výběr práce)(verze: 384)
Detail práce
   Přihlásit přes CAS
Stanovení koncentrace alfa-1-antitrypsinu ve stolici imunoanalytickou metodou
Název práce v češtině: Stanovení koncentrace alfa-1-antitrypsinu ve stolici imunoanalytickou metodou
Název v anglickém jazyce: Determination of the concentration of alpha-1-antitrypsin
in the stool by immunoassay method
Klíčová slova: α1 – antitrypsin, stolice, zánětlivá onemocnění, ELISA
Klíčová slova anglicky: α1 – antitrypsin, stool, inflammatory diseases, ELISA
Akademický rok vypsání: 2010/2011
Typ práce: diplomová práce
Jazyk práce: čeština
Ústav: Ústav biofyziky a informatiky 1. LF UK (11-00170)
Vedoucí / školitel: MUDr. Petr Kocna, CSc.
Řešitel: skrytý - zadáno vedoucím/školitelem
Datum přihlášení: 09.05.2011
Datum zadání: 09.05.2011
Datum a čas obhajoby: 15.09.2011 00:00
Datum odevzdání elektronické podoby:31.05.2011
Datum proběhlé obhajoby: 15.09.2011
Předmět: Obhajoba diplomové práce I (B01228)
Oponenti: prof. MUDr. Richard Průša, CSc.
 
 
 
Seznam odborné literatury
[1] Mařatka Z. a kol., Gastroenterologie, Praha, 1999, str. 204 – 207

[2] Masopust J., Klinická biochemie, Požadování a hodnocení biochemických vyšetření, část II., Praha, 1998, s. 497

[3] Zima T., Laboratorní diagnostika, Praha, 2007, s. 534

[4] Maruna P., Proteiny akutní fáze, Praha, 2004, s. 95 – 99

[5] Bartůňková J., Paulík M. a kol., Vyšetřovací metody v imunologii, Praha, 2005, s. 53 - 56

[6] Kolektiv autorů, Systémová enzymoterapie pro praxi, Praha, 2001

[7] Kocna P., Biochemická diagnostika v gastroenterologii, http://www1.lf1.cuni.cz/~kocna/biochem/text6.htm (21. 4. 2011)

[8] Elisa Technology, http://www.genwaybio.com/gw_file.php (5. 3. 2011)

[9] Kocna P., Gastrolab – Miniencyklopedie laboratorních metod v gastroenterologii, http://www1.lf1.cuni.cz/~kocna/glab/glency1.htm (18. 3. 2011)

[10] Schneiderka P. a kol., (2004), Kapitoly z klinické biochemie, 2. doplněné a přepracované vydání, Karolinum, Praha, (http://ukb.lf1.cuni.cz/vyuka/textbook.php) ( 5. 3. 2011)

[11] Mačák J., Mačáková J., Patologie, Praha 2004 s.

[12] Stříteský J., Patologie, Olomouc, 2001, s. 221- 244

[13] Murray R. K., Granner D. K., Mayes P. A., Rodwell V. W., Harperova Biochemie

[14] Biancone L., Fantini M., Tosti C., Bozzi R., Vavassori P. and Pallone F. Fecal α1-antitrypsin clearance as a marker of clinical relapse in patients with Crohn’s disease of the distal ileum. European Journal of Gastroenterology & Hepatology 2003, 15:261–266

[15] TAKEDA H., NISHISE S., FURUKAWA M., NAGASHIMA R., SHINZAWA H. and TAKAHASHI T. Fecal clearance of α1-antitrypsin with lansoprazole can detect protein-losing gastropathy. Digestive Diseases and Science 1999, November Vol. 44, 2313-2318

[16] Masopust J., Klinická biochemie, Požadování a hodnocení biochemických vyšetření, část I., Praha, 1991, s. 250 – 270

[17] Topinková K., Gliadinové sekvence v patogenezi a diagnostice celiakie, Diplomová práce, 2009, http://ukb.lf1.cuni.cz/diplomky/dp_topin09.pdf, s. 19, (27. 4. 2011)

[18] Wikipedie, http://cs.wikipedia.org/wiki/ELISA (25. 4. 2011)

[19] Dastych M., Breinek P. a kol., Klinická biochemie, Brno, 2008, s. 47

[20] Braamskamp Marjet J. A. M., Dolman Koert M., Tabbers Merit M., Protein – losing enteropathy in children. Eur J Pediatr 2010, 169:1179-1185

[21] Racek J. et al., Klinická biochemie, Druhé, přepracované vydání, Praha, 2006, s. 197

[22] Fischbach W., Becker W., Mössner J., Koch W. and Reiners C. Faecal alpha-1-antitrypsin and excretion of 111indium granulocytes in assessment of disease activity in chronic inflammatory bowel diseases. Gut 1987, 28: 386-393
[23] Fujii T., Shimizu T., Takahashi K., Kishiro M., Ohkubo M., Akimoto K., Yamashiro Y. Fecal [alpha]1-Antitrypsin Concentrations as a Measure of Enteric Protein Loss After Modified Fontan Operations. Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition. 2003, 37:577-580

[24] Keller K., Knobel R., Ewe K. Fecal [alpha]1- Antitrypsin in Newborn Infants. Journal of Pediatric Gastroenterology & Nutrition. 1997, 3:271-275

[25] Duangsmorn T., Kalayanee A., Suporn T., Supranee N., Rungtip S., Mongol K.
Fecal Alpha 1-Antitrypsin in Healthy and Intestinal – Disorder Thai Children. J Med Assoc Thai 2007, 90 (7): 1317-22
Předběžná náplň práce
Stanovení koncentrace α1 – antitrypsinu ve stolici je diagnostickým ukazatelem zánětlivých onemocnění tenkého a tlustého střeva, zejména malabsorpčního syndromu.
α1 – antitrypsin patří mezi skupinu plazmatických bílkovin s antiproteinázovým účinkem. Je syntetizován především v játrech, v malém množství v makrofázích jako antiproteáza fyziologicky inhibuje serinové proteázy neutrofilů. Z jater je uvolňován do krevního řečiště. α1 – antitrypsin je reaktant akutní fáze. Při zánětlivé reakci je tvorba α1 – antitrypsinu v játrech stimulována protizánětlivými vytokány. Vzestup hladiny v časné fázi zánětu koreluje s CRP a dalšími pozitivními proteiny akutní fáze.
Jako spolehlivý senzitivní a specifický marker ztráty proteinů může být clearence α1 – antitrypsinu ve stolici.
Stanovení α1 – antitrypsinu ve stolici lze provádět technikami ELISA, což je nekompetitivní enzymoimunoanalýza sloužící k detekci protilátek, u níž je využita schopnost imunoglobulinů vázat se na povrch umělých hmot (např. polystyrenu) a schopnost vázat enzymy na těžké řetězce imunoglobulinových molekul.
Cílem práce bylo porovnat komerční sety pro imunoanalytické stanovení koncentrace α1 – antitrypsinu ve stolici metodou ELISA, a to sety firmy Immundiagnostik a Ridascreen. Dále pak zjistit stabilitu α1 – antitrypsinu ve vzorku stolice a v extraktu připraveného ze vzorku stolice v závislosti na době a teplotě skladování a zavést metodu stanovení α1 – antitrypsinu ve stolici do běžné laboratorní praxe.
Pro porovnání setů bylo vybráno 20 vzorků pacientských stolic, u nichž byl předpoklad pozitivního α1 – antitrypsinu ve stolici, tzn. u pacientů, kteří v době odběrů prodělali zánětlivé onemocnění tenkého nebo tlustého střeva. Naměřené hodnoty koncentrací α1 – antitrypsinu byly následně vyhodnoceny a pomocí komerčního programu STATISTICA 9.1., byly zhotoveny grafy a vypočítán korelační koeficient (0,91), který naznačuje, že metody spolu dobře korelují.
Pro zjištění stability α1 – antitrypsinu byly vybrány tři vzorky pacientských stolic, u nichž byl předpoklad na pozitivitu α1 – antitrypsinu. Z každého vzorku byly připraveny extrakty, které byly skladovány při teplotách -30 oC, +5 oC a +25 oC po dobu jednoho dne, osmi dnů a k porovnání extrakt připravený v den měření. Dále byly stejným způsobem skladovány vzorky stolic, z nichž byly v den měření připraveny extrakty, které byly tentýž den analyzovány.
Námi naměřené výsledky hodnot koncentrace α1 – antitrypsinu v extraktech stolic naznačují, že nejvyšší hodnoty koncentrace α1 – antitrypsinu vykazují extrakty připravené den před analýzou, skladované v lednici. Tyto výsledky se jeví jako vhodnější varianta stanovení koncentrace α1 – antitrypsinu, než dle doporučení výrobce připravovat extrakt vždy čerstvý v den analýzy.
Při přípravě extraktu ze stolic, které byly uchovávány různou dobu při různých teplotách vyplynulo, že skladováním stolic 1 den při laboratorní teplotě či v lednici, hodnotu koncentrace α1 – antitrypsinu výrazně neovlivní. Zatímco skladování stolic 8 dní při laboratorní teplotě nebo v lednici, koncentraci α1 – antitrypsinu snižuje.
Předběžná náplň práce v anglickém jazyce
Determination of the concentration of α1 – antitrypsin in the stool is a diagnostic indicator of inflammatory diseases of the small and the large intestine, especially malabsorption syndrome.
α1 – antitrypsin belongs to the family of plasma proteins with antiproteinase effect. α1 – antitrypsin is synthesized in liver, in small amount in macrophage and is a protease inhibitor of serine proteases sercected from neutrophils.
α1 – antitrypsin is acute phase protein. Higher α1 – antitrypsin values are in early phase of inflammation associated with raised CRP and other pozitive acute phase proteins. Fecal α1 – antitrypsin clearance is a sensitive and specific marker of protein loss.
For α1 – antitrypsin determination in stool samples ELISA method can be used. ELISA is noncompetetive immunoassay used to detect presence of antibody or an antigen in a sample.
The aim of this work was to compare two ELISA sets (Immundiagnostik and Ridascreen) used for determination α1 – antitrypsin in the stool. Then examine stability of α1 – antitrypsin in the stool and in extract prepared from stool in various storing conditions temperature and time. After this establish this method as routine in laboratory.
20 patient stool samples were examined to compare ELISA sets. Samples were suggested to be α1 – antitrypsin positive, from patients suffering from inflammatory intestine diseases. Correlation between concentration of α1 – antitrypsin measured by sets were determined by program STATISTICA 9.1. Correlational coefficient was 0.91.
For examination stability of α1 – antitrypsin three stool samples suggested α1 – antitrypsin positive were chosen. From each sample extracts was prepared and stored at -30 oC, 5 oC and 25 oC. One extract from each sample was measured immediately, one was stored for a day and one for eight days. At the same temperatures for the same period of time, stool samples were stored and after that extract were prepared right before measurement.
Values of α1 – antitrypsin in stool extracts showed, that highest concentrations of α1 – antitrypsin were in extracts prepared one day before measurement and stored in refrigerator. Results suggest that compare to producer instructions which suggest to prepare extract right before measurement, is better to prepare stool extracts one day before measurement and store them in refrigerator.
Results also show that storing stool samples for one or eight days in refrigerator doesn´t affect α1 – antitrypsin concentrations. When stool samples were stored for eight days in refrigerator or at room temperature α1 – antitrypsin concentrations were lowered.
 
Univerzita Karlova | Informační systém UK