Zavedení metody na identifikaci genotypů asociovaných s kumarinovou antikoagulační terapií

• Název práce v češtině: Zavedení metody na identifikaci genotypů asociovaných ; s kumarinovou antikoagulační terapií
• Název v anglickém jazyce: The implementation of methods to identify genotypes associated with coumarin; anticoagulant therapy
• Klíčová slova: warfarin, farmakogenetika, PCR s reverzní hybridizací, CYP2C9, VKORC1
• Klíčová slova anglicky: Warfarin, farmacogenetics, PCR with reversion hybridization, CYP2C9, VKORC1
• Akademický rok vypsání: 2010/2011
• Typ práce: bakalářská práce
• Jazyk práce: čeština
• Ústav: Ústav lékařské chemie a klinické biochemie (13-352)
• Vedoucí / školitel: doc. Ing. Karel Kotaška, Ph.D.
• Řešitel: skrytý - zadáno vedoucím/školitelem
• Datum přihlášení: 04.01.2011
• Datum zadání: 04.01.2011
• Datum a čas obhajoby: 31.05.2011 09:00
• Datum odevzdání elektronické podoby: 09.05.2011
• Datum odevzdání tištěné podoby: 09.05.2011
• Datum proběhlé obhajoby: 31.05.2011
• Oponenti: doc. Ing. Eva Klapková, Ph.D.

Seznam odborné literatury

1 HYNIE, Sixtus. Speciální farmakologie Díl IV. : Látky ovlivňující kardiovaskulární systém. Vyd. 1. Praha : Univerzita Karlova v Praze, Nakladatelství Karolinum 2000, 2000. 290 s. ISBN 80-7184-448-9.

2 DAHLBÄCK B. (2000) Blood coagulation. Lancet, 355, 1627–1332. ISSN 1473-5733.

3 DAHLBÄCK B, STENFLO J. (2000) The protein C anticoagulant system. In: Stamatoyannopoulos G, Nienhuis AW, Majerus PW et al. (eds) The Molecular Basis of Blood Diseases, 3rd edn. Philadelphia: W.B. Saun¬ders, pp. 614–656.

4 ESMONT CT. (1992) The protein C anticoagulant pathway. Arteriosclerosis and Thrombosis, 12, 135–145.

5 Wikimediea commnos [online]. 2010-02-14 20:03 (UTC) [cit. 2011-03-25]. Coagulation deutsch. Dostupné z WWW: <http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Coagulation_deutsch.svg>.

6 CHLUMSKÝ, Jaromír, et al. Antikoagulační léčba. Vyd. 1. Praha : Grada Publishing, 2005. 220 s. ISBN 80-247-9061-0.

7 KUMAR, Dhavendra. Genomics and Clinical medicine. Vyd. 1. Madison Avenue, New York : Oxford Univesity Press, Inc., c2008. 651 s. ISBN 978-0-19-518813-4.

8 DUCHOŇ, Jiří, et al. Lékařská chemie a biochemie : Učebnice pro lékařské fakulty. Vyd. 1. Praha : Avicenum, zdravotnické nakladatelství, n.p., 1985. 716 s. cnb000012197.

9 GO AS, HYLEK EM, PHILLIPS KA, et al. Prevalence of diagnosed atrial fibrillation in adults: national implications for rhythm management and stroke prevention: the AnTicoagulation and Risk Factors In Atrial Fibrillation (ATRIA) Study. JAMA. 2001;285:2370-2375. ISSN 1538-3598.

10 MIYSAKA Y, BARNES ME, GERSH BJ, et al. Secular trends in incidence of atrial fibrillation in Olmsted County, Minnesota, 1980 to 2000, and implications on the projections for future prevalence. Circulation. 2006;114:119-125.ISSN 0009-7322.

11 GAGE BF, WATERMAN AD, SHANNON W, BOECHLER M, RICH MW, RADFORD MJ. Validation of clinical classification schemes for predicting stroke: results from the National Registry of Atrial Fibrillation. JAMA. 2001;285:2864-2870. ISSN 1538-3598

12 HART RG, PEARCE LA, AGUILAR MI. Meta-analysis: antithrombotic therapy to prevent stroke in patients who have nonvalvular atrial fibrillation. Ann Intern Med. 2007146:857-867.

13 SINGER DE, ALBERS GW, DALEN JE, et al. Antithrombotic therapy in atrial fibrillation. ACCP evidence-based clinical practice guidelines. Chest. 2008;133:546S-592S. ISSN 1931-3543

14 ANSELL J, HIRSH J, HYLEK E, JACOBSON A, CROWTHER M, PALARETI G. The pharmacology and management of the vitamin K antagonists: ACCP evidence-based clinical practice guidelines. Chest. 2008;133:160S-198S.

15 BUDNITZ DS, SHEHAB N, KEGLER SR, RICHARDS CL. Medication use leading to emergency department visits for adverse drug events in older adults. Ann Intern Med. 2007;147:755-765. ISSN 1539-3704.

16 AREPALLY G, BAUER KA, BHATT DL, et al. The use of antithrombotic therapies in the prevention and treatment of arterial and venous thrombosis. Crit Path Cardiol. 2010;9:41-48.ISSN 1477-0962.

17 THACKER, S. M., GRICE, G.R., MILIGAN P.E., GAGE B.F. Dosing antikoagulant therapy with kumarin drugs: is genotyping clinically useful?Yes. J. of Thrombosis and Haemostasis, 2008, 6, p. 1445-1449.

18 BODIN, L., VERSTUYFT, C., TREGOUET, D. A. et al. Cytochrome P450 2C9 (CYP2C9) and vitamin K-epoxide reduktase (VKORC1) genotypes as determinant sof acenocoumarol sensitivity. Blood, 2005, 106, p. 135-141. ISSN 1528-0020.

19 SCONSE, E. A., KHAN, T. I., ŠIBNE, H. A., AVERY, P. et al. The impact of CYP2C9 and VKORC1 genetic polymorphism and patient characteristics upon warfarin dose requirement: proposal for a newdosing regiment. Blood, 2005, 106, p. 2329-2333. ISSN 1528-0020.

20 KESSLER, P. Farmakogenetika warfarinu. Doporučení pro klinickou praxi. Vydáno 16.3.2006 u příležitosti konání XII. Pařízkových dní.

21 LEWIS, R.J., TRAGER, W.F., CHAN, K.K., BRECKENRIDGE, A., ORME, M., ROLAND, M. & SCHARY, W. (1974). Warfarin. Stereochemical aspects of its metabolism and the interaction with phenylbutazone. J. clin. Invest., 53, 1607-1617. ISSN 0021-9738.

22 M. UFER, “Comparative pharmacokinetics of vitamin K antagonists warfarin, phenprocoumon and acenocoumarol,” Clinical Pharmacokinetics, vol. 44, no. 12, pp. 1227–1246, 2005. ISSN 0312-5963.

23 M.UFER, J. O. SVENSSON, K.W. KRAUSZ, H. V. GELBOIN, A. RANE, and G. TYBRING, “Identification of cytochromes P450 2C9 and 3A4 as the major catalysts of phenprocoumon hydroxylation in vitro,” European Journal of Clinical Pharmacology, vol. 60, no. 3, pp. 173–182, 2004. ISSN 1432-1041.

24 M. UFER, B. KAMMERER, R. KAHLICH et al., “Genetic polymorphisms of cytochrome P450 2C9 causing reduced phenprocoumon (S)-7-hydroxylation in vitro and in vivo,” Xenobiotica, vol. 34, no. 9, pp. 847–859, 2004. ISSN 0049-8254.

25 J. KIRCHHEINER, M. UFER, E.-C. WALTER et al., “Effects of CYP2C9 polymorphisms on the pharmacokinetics of R- And S-phenprocoumon in healthy volunteers,” Pharmacogenetics, vol. 14, no. 1, pp. 19–26, 2004. ISSN 1473-561X.

26 M. K. KOVAC, A. R. MASLAC, L. B. RAKICEVIC et al., “The c. − 1639G > A polymorphism of the VKORC1 gene in Serbian population: retrospective study of the variability in response to oral anticoagulant therapy,” Blood Coagulation and Fibrinolysis, vol. 21, no. 6, pp. 558–563, 2010. ISSN 1473-5733.

27 P. H. REITSMA, J. F. VAN DER HEIJDEN, A. P. GROOT, F. R. ROSENDAAL, and H. R. BÜLLER, “A C1173T dimorphism in the VKORC1 gene determines coumarin sensitivity and bleeding risk,” PLoS Medicine, vol. 2, no. 10, article no. e312, 2005. ISSN 1549-1676.

28 VASAN RS. Biomarkers of cardiovascular dinase: Molecular basis and practical considerations. Circulation 2006;113: 2335-2362. ISSN 0009-7322.

29 DZAU, Victor J.; LIEW, Choong-Chin. Cardiovascular Genetics and Genomics for the cardiologist. Vyd. 1. Austria : Blackwell Publishing, 2007. 276 s. ISBN 978-1-4051-3394-4.

30 VOORA D, EBY C, LINDER MW et al. Prospective dosing of warfarin used on cytochrome P-450 2C9 genotype. Thromb Haemost 2005; 93:700-705. ISSN 0340-6245.

31 Li T, CHANG CY, Jin DY, Lin PJ, KHYOROVA A, STAFFORD DW. Identification of the gene for vitamin K epoxide reduktase. Nature 2004; 427:541-544. ISSN 0028-0836.

32 ROST S, FREGIN A, IVASKEVICIUS V et al. Mutations in VKORC1 cause warfarin resistence and multiple coagulation factor deficiency type 2. Nature 2004; 427: 537-541. ISSN 0028-0836.

33 D´ANDREA G, D´AMBROSIO RL, Di PERNA P et al. A polymorphism in the VKORC1 gene is associated with an interindividual variability in the dose-anticoagulant effect of warfarin. Blood 2005; 105: 645-649. ISSN 1528-0020.

34 HARRINGTON DJ, UNDERWOOD S, MORSE C, SHEARER MJ, TUDDEMHAM EG, MUMFORD AD. Pharmacodynamic resistance to warfarin associated with a Val66Met substitution in vitamin K epoxide reduktase complex subunit 1. Thromb Haemost 2005; 93 23-26. ISSN 0340-6245.

35 PELZ HJ, ROST S, HUNERBERG M et al. The genetic basis of resistance to anticoagulation in rodents. Genetics 2005;170 1839-1847. ISSN 1943-2631.

36 WADELIUS M, CHEN LY, DOWNES K et al. Common VKORC1 and GGCX polymorphism associated with warfarin dose. Pharmacogenomics J 2005; 5:262-270. ISSN 1473-1150.

37 YUAN HY, Chen JJ, Lee MT et al. A novel functional VKORC1 promoter polymorphism is associated with inter-individual and inter-ethnic differences in warfarin sensitivity. Hum Mol Genet 2005; 14: 1745-1751. ISSN 1460-2083.

38 SCONCE EA, KHAN TI, WYNNE HA et al. The impal of CYP2C9 and VKORC1 genetic polymorphism and patient characteristics upon warfarin dose requirements: proposal for a new dosing regiment. Blood 2005; 106: 2329-2333.ISSN 1528-0020.

39 RIEDER MJ, REINER AP, GARGE BF et al. Effect of VKORC1 haplotypes on transcriptional regulativ and warfarin dose. N Engl J Med 2005; 352: 2285-2293.

40 VEENSTRA DL, You JH, RIEDER MJ et al. Association of vitamin K epoxide reductase complex 1 (VKORC1) variants with warfarin dose in a Hong Kong Chinese patient population. Pharmacogenet Genomics 2005;15: 687-691.ISSN 1744-6880

41 CHU, P.-H., HUANG, T.-Y., WILLIAMS, J., STAFFORD, D. W. Purified vitamin K epoxide reductase alone is sufficient for conversion of vitamin K epoxide to vitamin K and vitamin K to vitamin KH(2). Proc. Nat. Acad. Sci. 103: 19308-19313, 2007. (Not available in PubMed).

42 LI, T., Chang, C.-Y., JIN, D.-Y., LIN, P.-J., KHVOROVA, A., STAFFORD, D. W. Identification of the gene for vitamin K epoxide reductase. Nature 427: 541-544, 2004. [PubMed: 14765195]). ISSN 0028-0836.

43 RIEDER, M. J., REINER, A. P., GAGE, B. F., NICKERSON, D. A., EBY, C. S., MCLEOD, H. L., BLOUGH, D. K., THUMMEL, K. E., VEENSTRA, D. L., RETIIE, A. E. Effect of VKORC1 haplotypes on transcriptional regulation and warfarin dose. New Eng. J. Med. 352: 2285-2293, 2005. [PubMed: 15930419].

44 WADELIUS, M., CHEN, L. Y., DOWNES, K., GHORI, J., HUNT, S., ERIKSSON, N., WWALLERMAN, O., MELHUS, H., WADELIUS, C., BENTLEY, D., DELOUKAS, P. Common VKORC1 and GGCX polymorphisms associated with warfarin dose. Pharmacogenomics J. 5: 262-270, 2005. [PubMed: 15883587].

45 Klinická biochemie a metabolismus : Časopis české společnosti klinické biochemie a společnosti lékařské genetiky. In Farmakogenetika a farmakokinetika warfarinu. Vyd. 1. Praha : Česká lékařská společnost J.E. Purkyně, 2009. s. 208. ISSN 1210-7921.

46 ROST S et al., Novel mutations in the VKORC1 gene of wild rats and mice--a response to 50 years of selection pressure by warfarin. BMC Genet. 2009 Feb 6 ;10:4. [PubMed: 19200363]). ISSN 1471-2156.

47 ROST S et al., Mutations in VKORC1 cause warfarin resistance and multiple coagulation factor deficiency type 2. Nature. 2004 Feb 5 ;427(6974):537-41. ISSN 0028-0836.

48 MACNICOLL AD, GILL JE. Revised methodology for a blood clotting response test for identification of warfarin-resistant Norway rats (Rattus norvegicus) Eur Plant Protect Org Bull. 1993;23:701–707.

49 PELZ HJ, ROST S et Al., The genetic basis of resistance to anticoagulants in rodents. Genetics. 2005 Aug ;170(4):1839-47. Epub 2005 May 6. ISSN 1943-2631.

50 STUART A. Scott et al Pharmacodynamic resistance to warfarin associated with a Val66Met substitution in vitamin K epoxide reductase complex subunit 1. Thromb Haemost. 2005 Jan ;93(1):23-6. ISSN 0340-6245.

51 LAUSSER R et al., Warfarin resistance in a French strain of rats. J Biochem Mol Toxicol. 2005 ;19(6):379-85.

52 NELSON DR, STRBOEL HW. Evolution of cytochrome-P-450 proteins. Mol. Biol. Evol. 1987; 4: 572-593.ISSN 1537-1719.

53 GUENGERICH FP. Common and uncommon cytochrome P450 reactions related to metabolism and chemical toxicity. Chem. Res. Toxicol. 2001; 14: 611-650. ISSN 0893-228X.

54 STIBOROVA M, HUDEČEK J, HODEK P, FREI E. Vyznam cytochromů P450 pro lidske zdravi. Chem. Listy 1999; 93: 229-237. ISSN 0009-2778.

55 SONO M, ROACH MP, COULTER ED, DAWSON JH. Heme-Containing Oxygenases. Chem. Rev. (Washington, DC, U. S.) 1996; 96: 2841-2887.

56 KOHN, M. H., PELZ, H.-J. A gene-anchored map position of the rat warfarin-resistance locus, Rw, and its orthologs in mice and humans. Blood 96: 1996-1998, 2000. [PubMed: 10961907]). ISSN 1528-0020.

57 ROSS, K. A., BIGHAM, A. W., EDWARDS, M., GOZDZIK, A., SUAREZ-KURTZ, G., PARRA, E. J. Worldwide allele frequency distribution of four polymorphisms associated with warfarin dose requirements. J. Hum. Genet. 55: 582-589, 2010. [PubMed: 20555338]. ISSN 0021-5074.

58 AITHAL, G. P., DAY, C. P., KESTEVEN, P. J. L., DALY, A. K. Association of polymorphisms in the cytochrome P450 CYP2C9 with warfarin dose requirement and risk of bleeding complications. Lancet 353: 717-719, 1999. [PubMed: 10073515].

59 WILLIAMS, P. A., COSME, J., WARD, A., AANGOVE, H. C., VINKOVIC, D. M., JhotHOTI, H. Crystal structure of human cytochrome P450 2C9 with bound warfarin. Nature 424: 464-468, 2003. [PubMed: 12861225]. ISSN 0028-0836.

60 SANDERSON S, EMERY J, HIGGINS J: CYP2C9 gene variants, drug dose, and bleeding risk in warfarin-treated patients: a HuGEnet systematic review and meta-analysis. Genet Med. 2005 Feb;7(2):97-104. ISSN 1530-0366.

61 International Warfarin Pharmacogenetics Consortium KLEIN TE et al., Estimation of the warfarin dose with clinical and pharmacogenetic data. New Eng. J. Med. 360: 753-764, 2009. [PubMed: 19228618]).

62 ANDERSON, J. L., HORNE B. D., STEVENS, S. M., GROVE, A. S. et al. Randomized trial of genotype-guided versus standard warfarin dosing in patients initiating oral anticoagulation. Circulation, 2007, 116, p. 2563–2570. ISSN 0009-7322.

63 CARACAO, Y., BLOTNIC, S., MUSZKAT, M. CYP2C9 genotype guided warfarin prescribing enhances the effi casy and safety of anticoagulation: a prospective randomized controlled study. Clin.Pharmacol. Ther., 2008, 83, p. 460–470.ISSN 1532-6353.

64 HIRSH, J., GUYATT, G., ALBERS, G. W., HARRINGTON, R., SCHUEMANN, H. J. Executive Summary. American College of Chest Physicians Evidence-Based Clinical Practice Guidelines. (8th Edition). Chest, 2008, 133, p. 71S–109S.

65 ANSELL J., Warfarin versus new agents: interpreting the data. Hematology Am Soc Hematol Educ Program. 2010 ;2010:221-8.

66 KOČÁREK, Eduard. Molekulární biologie v medicíně. Vyd. 1. Brno : Národní centrum ošetřovatelství a nelékařských zdravotnických oborů, Vinařská 6, 2007. 218 s. ISBN 978-80-7013-450-4.

67 SAIKI R.K., GEFFAND D.H., STOFFEL S., SCHARF S.J., HIGUCHI R., Horn G.T., Mullis K.B., a Erlich H.A. (1988) Primer-directed enzymatic amplification of DNA with thermostable DNA-polymerase. Science 239: 487-491. ISSN 1095-9203.

68 ORITA, M., Y. SUZUKI, T. SEKIYA, and K. HAYASHI. 1989. Rapid and sensitive detection of point mutations and DNA polymorphisms using the polymerase chain reaction. Genomics 5: 874-879. ISSN 0888-7543.

69 FODDE, R. and LOSEKOOT, M. (1994), Mutation detection by denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE). Human Mutation, 3: 83–94. doi: 10.1002/humu.1380030202. ISSN 1059-7794.

70 SKŘÍTECKÁ, Marie. Možnosti využití molekulárně biologických metod v historické a prehistorické antropologii [online]. Brno, 2006. 55 s. Bakalářská práce. Masarykova Univerzita v Brně. Dostupné z WWW: <http://is.muni.cz/th/100979/prif_b/bakalarska_prace_2006.pdf>.

71 B. FRIEDECKÝ, L. ŠPRONGL, J. KRATOCHVÍL a Z. PLZÁK, Doporučení k provádění validace a verifikace analytických metod v klinických laboratořích. Vyd 2. Praha, ČSKB ČLS JEP, 11/2010. [cit. 2011-04-25] Dostupné z: www.cskb.cz/cskb.php?pg=doporuceni--validace-a-verifikace-metod.

72 B. FRIEDECKÝ a kol. Validace a verifikace molekulárně biologických metod založených na analýze extrahumánního genomu, doplněk k doporučení. Praha, schváleno ČSKB 2/2006. [cit. 2011-04-25] Dostupné z: <http://www.cskb.cz/res/file/kbm/kbm-2006-14-2-118-124.pdf>.

73 TNI 01 0115:2009. Mezinárodní metrologický slovník - Základní a všeobecné pojmy a přidružené termíny (VIM).

74 SN EN ISO 9000:2006. Systémy managementu kvality. Základy, zásady, slovník.

75 Klinická biochemie a metabolismus : Časopis české společnosti klinické biochemie a společnosti lékařské genetiky. Směrnice Rady IVD 98/79/ES (Directive 98/79 EC) a kvalita analytických procesů. Vyd. 1. Praha : Česká lékařská společnost J.E. Purkyně, 2005. s. 207. Dostupné z: http://nts.prolekare.cz/cls/odkazy/KBM20054-207.pdf

76 Klinická biochemie a metabolismus : Časopis české společnosti klinické biochemie a společnosti lékařské genetiky. Doporučení k provádění validace a verifikace analytických metod v klinických laboratořích. Vyd. 1. Praha : Česká lékařská společnost J.E. Purkyně, 2011. s. 36.

77 BRDIČKA, R., et al. Analytická validace metod molekulární genetiky určených pro analýzu lidskéhDoporučení Společnosti lékařské genetiky ČLS JEPo genomu : Analytická validace metod molekulární genetiky určených pro analýzu lidského genomu. In Klinická biochemie a metabolismus : časopis české společnosti klinické biochemie a společnosti lékařské genetiky [online]. Praha : Česká lékařská společnost J.E. Purkyně, 2007 [cit. 2011-04-05]. Dostupné z WWW: <http://www.eurogentest.org/web/files/public/unit5/KBM0701_SLG_58.pdf>.

78 BAREK, J. et al. Metrologická terminologie v chemii. Chem. Listy, 2000, 94, s. 39–444. ISSN 0009-2770.

79 Michael MCPHERSON & Simon MOLLER, PCR second edition. Vyd. 2. New York : Národní Taylor&Franci Group, Madison Avenue 270, 2006. 279 s. ISBN 0-203-00267-9.

80 Standardní operační postup - metodický č. VSOPM_8ÚKBP_218/2011-1
Vyšetření polymorfizmů v genech CYP2C9 a VKORC1

81 ČERMÁKOVÁ, Marta, et al. Klinická biochemie 2.díl. Vyd. 1. Brno : Národní centrum ošetřovatelství a nelékařských zdravotnických oborů, Vinařská 6, 2005. 164 s. ISBN 80-7013-424-0.

82 KÁŠ J., KODÍČEK M., VALENTOVÁ O.: Laboratorní techniky biochemie. 1. vyd. Vysoká škola chemicko-technologická v Praze, Praha 2006. Str. 152. ISBN
80-7080-586-2

Předběžná náplň práce

Antagonisté vitamínu K (kumariny) jsou nejrozšířenější orální antikoagulanty pro prevenci a léčbu žilního tromboembolismu, infarktu myokardu a iktu. Jejich široká interindividuální variabilita v reakci na určité dávkování způsobuje výrazné riziko komplikací nejen v počátcích terapie. Nesprávné dávkování může způsobit život ohrožující komplikace, jako je krvácení v případě předávkování nebo nedostatečnou profylaxi kvůli nedostatečné dávce. Interindividuální variabilita velikosti dávky derivátů kumarinu je podmíněna řadou faktorů jak genetických, tak vnějšího prostředí (BMI, věk, dieta a užívání dalších léků). Cílem práce je zavést metodu na identifikaci genotypů (polymorfismů v genech CYP2C9 a VKORC1) asociovaných s antikoagulační terapií. Principem metody je polymerázová řetězová reakce s reverzní hybridizací. Efekt polymorfismů CYP2C9 a VKORC1 na velikost denní dávky kumarinu (warfarinu) potřebné k udržení terapeutického rozmezí se navzájem potencuje. Pětina populace patří k vysoce rizikové skupině nosičů polymorfismu VKORC1 AA nebo VKORC1 GA a současně alespoň jedné mutace CYP2C9. Tito pacienti jsou ve vysokém riziku předávkování warfarinem, zejména v úvodu léčby. Doporučené dávkování zvoleného antikoagulantu pro konkrétního pacienta je možné získat po zadání údajů do internetového formuláře. Do formuláře je potřeba zadat základní údaje o pacientovi (věk, národnost, pohlaví, aktuální hodnota INR a výsledky testů na polymorfismy CYP2C9 a VKORC1). Na základě uvedených údajů bude vypočtena hodnota dávky pro konkrétního pacienta.

Předběžná náplň práce v anglickém jazyce

The vitamin K antagonists (coumarins) are the most common oral anticoagulants for prevention and treatment of the venous thromboembolism, myocardial infarction and stroke. Their wide interindividual variability in a dosing reaction causes high risk of complication at the start of the therapy. Wrong dosing can cause life-threatening complications including bleeding in overdosing or inadequate prophylaxis with low dose. Interindividual variability of the dose is related by both genetic factors and external environment (BMI, age, diet and using other medicaments). The aim of this work is an introduction of the method for identification of genotypes (polymorphisms in genes CYP2C9 and VKORC1) associated with the anticoagulation treatment. The principle of this method is Polymerase Chain Reaction with reverse hybridization. The effect of the polymorphism CYP2C9 and VKORC1 depend on daily coumarins dose necessary for therapeutic range is mutually potentiated. The one fifth of the population is variant carrier for high risk polymorphism VKORC1 AA or VKORC1 GA and one of the CYP2C9 variants. These patients are in a high risk for overdosing with warfarin, especially at the start of the treatment. We can get a recommended dose of anticoagulation for the specific patient when we fill in the form on the internet. It is necessary to add the demographic and clinical data of the patient (age, ethnic, sex, actual INR and results of the polymorphism CYP2C9 and VKORC1 tests. Accordingly to this data, the estimated dose for the individual patient is calculated.